1.實驗名稱:IHC染色和結果判讀

2.實驗材料和器材:組織切片、微波爐、IHC專用微波盒、PAP 筆(厭水筆)、染色盒、擦手紙、3%雙氧水、10%BSA、PBS buffer&0.1% Tween20、一抗(Mouse anti Rat Actin IgG)、二抗(Goat anti Mouse IgG-biotin)、streptaviotin-HRP、DAB、Hematoxylin、光學顯微鏡、玻片架、蓋玻片、手套、微量滴管

3.實驗流程:

(1)將玻片(已脫蠟)置於玻片架上,微波5分鐘,補水再微波5分鐘

(2)使用厭水筆在玻片上將組織圈起來

(3)將玻片置於染色盒中,吸取200ml 3%雙氧水至組織上靜置5分鐘

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(4)倒掉玻片上的雙氧水,吸取200ml 10% BSA滴至組織上靜置5分鐘

(5)倒掉BSA,滴上200ml一抗,置於染色盒再放冰箱反應7天(4℃)

(6)取出玻片置於玻片架,放入IHC專用微波盒以PBS+0.1% Tween 20洗3次(每次5分鐘,最後一次不倒掉)

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(7)將玻片置於染片盒,滴上200ml 二抗,反應1小時

(8)倒掉二抗,將玻片置於玻片架放入IHC專用微波盒以PBS+0.1% Tween 20洗3次(每次5分鐘,最後一次不倒掉)

(9)將玻片移入染片盒,瀝掉殘餘buffer,加入streptaviotin-HRP反應30分鐘

(10)將玻片移至IHC專用微波盒以PBS+0.1% Tween 20洗3次(每次5分鐘)

(11)加入DAB(呈色劑)反應10分鐘

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(12)加入Hematoxylin(對比染色)染3分鐘

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(13)水洗10分鐘後自然晾乾

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(14)使用阿拉伯膠封片

(15)以顯微鏡觀察

4.實驗結果:由倍率低到高排列;色差為不同手機拍攝導致

組織有碎裂情形

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轉動顯微鏡的細調節輪,在焦距微調時發現組織有折疊

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濃染的藍色顆粒為細胞核

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5.注意事項:

(1)在移動玻片時速度要快,避免組織乾掉使3級結構破壞 

(2)微波時,必須使用IHC微波專用盒,使用其他容器可能會有蛋白質殘留而影響反應;需加熱至沸騰,並補水以免離子濃度改變

(3)藥劑具有神經毒,須戴手套操作

(4)Wash要徹底以避免雜訊

(5)染片盒底部要鋪沾濕的擦手紙,以免切片長時間在冰箱中乾掉

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ps上方那一整排長得有點像針筒的東西就是微量滴管

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賣一下老師(x

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中間有個步驟要反應1小時,所以用這段時間來上課

聽說那些看起來很平凡的厭水筆和IHC專用微波盒、染色盒其實都超貴的,我記得老師說她的學生時代那隻筆是破萬的(((゚Д゚;)))

然後同學是一定要賣的

這次又賣哈利鼠(〃∀〃)

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認真的男人最帥(๑´ㅂ`๑)

太認真了認真到沒發現其實顯微鏡放反了XD鏡臂不是在自己這一邊

 

原稿

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