冷雨敲窗

實驗結果：

1.如何判定BSA或myoglobin：由之前的實驗可知，BSA的分子量介於50~70kDa之間，myoglobin的分子量為17800Da (電泳出來的訊號接近15000 Da)

2.原理：膠體電泳利用了電性和分子量兩種特性。使用SDS令蛋白質帶負電，被正電吸引往下跑，通過孔篩時，分子量大者通過較慢，分子量小者較快。

3.問題與討論：

(1)做膠：我們製作下膠失敗6次，前5次上緣總是傾斜，後來發現原因為架膠的器材下方黑色海綿不平整，才導致這個結果；更換器材後解決。

(2)Band粗細及染色：編號5.6.7的蛋白質訊號強度不如11.12，推測為純化不夠，濃度沒有編號11.12高，故顏色較淡也較細。

(3)雜訊：在15kDa及50~75kDa其他處亦有訊號(如編號6的band有明顯暈開)，可能是管柱層析無法精確排除其他蛋白質所造成。

4.注意事項：

A.架膠時：

(1)玻璃片可先用酒精擦拭，方便之後取下膠體

(2)玻璃必須放在正確位置後方可鎖緊，以免玻璃夾碎防

(3)卡楯需檢查是否卡緊，防止膠體或buffer外漏

B.製膠時：

(1)30% acylamide solution 具有神經毒，實驗環境應通風，傾倒時亦須小心謹慎

(2)TEMED和10%APS最後才加入避免膠體過早凝結，在加入上述兩種溶液前須先將pipetment與tips準備好，以利動作迅速

(3)在下膠凝固前可用水將上緣壓平

C.電泳時：

(1)不要在兩側load sample，因為干擾較多，訊號會不精確

(2)Buffer的量要足夠，避免斷電

(3)電泳槽的正負極務必正確，一但接錯便不可挽回，須重做實驗

(4)電流須視膠片調整(1片25mA；2片50 mA)

(5)通電時，須將提示牙齒位置的塑膠片取下

(6)電泳至距底部1公分時斷電

D.封膠時：

(1)使用大量的水，避免氣泡產生，尤其膠體附近更要注意

(2)蓋上凝膏紙往後折平整，可避免檢查是否有氣泡時造成干擾

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那個時候架膠架到快中風◢▆▅▄▃崩╰(〒皿〒)╯潰▃▄▅▇◣

居然是那個架子的問題=  =

想說奇怪我們四個人怎麼做起來都一樣歪

這個實驗做好久啊

算了一下我們這組在實驗室關了快6個小時

隔壁班更慘烈，有一組做到天黑_(┐「ε:)_

原稿