冷雨敲窗

1.實驗名稱：IHC染色和結果判讀

2.實驗材料和器材：組織切片、微波爐、IHC專用微波盒、PAP 筆(厭水筆)、染色盒、擦手紙、3%雙氧水、10%BSA、PBS buffer&0.1% Tween20、一抗(Mouse anti Rat Actin IgG)、二抗(Goat anti Mouse IgG-biotin)、streptaviotin-HRP、DAB、Hematoxylin、光學顯微鏡、玻片架、蓋玻片、手套、微量滴管

3.實驗流程：

(1)將玻片(已脫蠟)置於玻片架上，微波5分鐘，補水再微波5分鐘

(2)使用厭水筆在玻片上將組織圈起來

(3)將玻片置於染色盒中，吸取200ml 3%雙氧水至組織上靜置5分鐘

(4)倒掉玻片上的雙氧水，吸取200ml 10% BSA滴至組織上靜置5分鐘

(5)倒掉BSA，滴上200ml一抗，置於染色盒再放冰箱反應7天(4℃)

(6)取出玻片置於玻片架，放入IHC專用微波盒以PBS+0.1% Tween 20洗3次(每次5分鐘，最後一次不倒掉)

(7)將玻片置於染片盒，滴上200ml 二抗，反應1小時

(8)倒掉二抗，將玻片置於玻片架放入IHC專用微波盒以PBS+0.1% Tween 20洗3次(每次5分鐘，最後一次不倒掉)

(9)將玻片移入染片盒，瀝掉殘餘buffer，加入streptaviotin-HRP反應30分鐘

(10)將玻片移至IHC專用微波盒以PBS+0.1% Tween 20洗3次(每次5分鐘)

(11)加入DAB(呈色劑)反應10分鐘

(12)加入Hematoxylin(對比染色)染3分鐘

(13)水洗10分鐘後自然晾乾

(14)使用阿拉伯膠封片

(15)以顯微鏡觀察

4.實驗結果：由倍率低到高排列；色差為不同手機拍攝導致

組織有碎裂情形

轉動顯微鏡的細調節輪，在焦距微調時發現組織有折疊

濃染的藍色顆粒為細胞核

5.注意事項：

(1)在移動玻片時速度要快，避免組織乾掉使3級結構破壞 

(2)微波時，必須使用IHC微波專用盒，使用其他容器可能會有蛋白質殘留而影響反應；需加熱至沸騰，並補水以免離子濃度改變

(3)藥劑具有神經毒，須戴手套操作

(4)Wash要徹底以避免雜訊

(5)染片盒底部要鋪沾濕的擦手紙，以免切片長時間在冰箱中乾掉

ps上方那一整排長得有點像針筒的東西就是微量滴管

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賣一下老師(x

中間有個步驟要反應1小時，所以用這段時間來上課

聽說那些看起來很平凡的厭水筆和IHC專用微波盒、染色盒其實都超貴的，我記得老師說她的學生時代那隻筆是破萬的(((ﾟДﾟ;)))

然後同學是一定要賣的

這次又賣哈利鼠(〃∀〃)

認真的男人最帥(๑´ㅂ`๑)

太認真了認真到沒發現其實顯微鏡放反了XD鏡臂不是在自己這一邊

原稿